在現(xiàn)代生物醫(yī)學研究中，原代細胞的獲取是連接組織樣本與下游功能分析（如單細胞RNA測序）的關鍵第一步。而組織解離液——即用于將實體組織分解為單細胞懸液的酶混合物或化學試劑——其選擇與優(yōu)化直接決定了細胞得率、活性及轉錄組保真度。因此，合理設計解離方案已成為單細胞組學研究中的核心技術環(huán)節(jié)。 不同組織類型因其細胞外基質（ECM）成分、細胞間連接強度及細胞類型組成差異，對解離條件的需求迥異。例如，肝臟富含膠原蛋白，需較高濃度的膠原酶；而腦組織神經(jīng)元脆弱，應避免強機械剪切和長時間酶處理。常用的解離酶包括膠原酶（Collagenase）、胰蛋白酶（Trypsin）、分散酶（Dispase）、透明質酸酶（Hyaluronidase）以及DNase I（降解釋放的DNA以降低黏度）。這些酶可單獨使用，但更常見的是根據(jù)目標組織特性進行組合，形成定制化解離液。
解離液的優(yōu)化需兼顧效率與溫和性。過度解離會損傷細胞膜、激活應激通路，甚至誘導凋亡相關基因表達，從而干擾單細胞測序結果的真實性；而解離不足則導致細胞團塊殘留，影響微流控平臺的捕獲效率。為此，研究者常通過預實驗系統(tǒng)評估不同酶配比、作用時間、溫度及機械輔助方式（如吹打、振蕩）對細胞活力（通常以臺盼藍染色或流式檢測Annexin V/PI判斷）和得率的影響。
近年來，商業(yè)化的組織解離試劑盒（如Miltenyi Biotec的Tumor Dissociation Kit、STEMCELL Technologies的Lung Dissociation Kit等）提供了標準化起點，但往往仍需針對特定樣本進行微調。例如，在腫瘤微環(huán)境研究中，為保留免疫細胞亞群完整性，常在解離液中加入蛋白酶抑制劑或抗氧化劑以減少非特異性激活。此外，冷活性酶（cold-active proteases）的應用也逐漸興起，可在4°C下實現(xiàn)溫和解離，有效抑制應激基因表達。
進入單細胞測序流程后，解離質量的影響更為顯著。低質量的單細胞懸液不僅導致細胞捕獲失敗，還可能引入技術噪音。已有研究表明，解離過程中激活的FOS、JUN等即刻早期基因（IEGs）會在scRNA-seq數(shù)據(jù)中形成“假陽性”信號，誤導細胞狀態(tài)判讀。因此，部分實驗室采用RNA穩(wěn)定性增強劑（如RNAlater）或在解離緩沖液中添加轉錄抑制劑（如Actinomycin D）以控制此類干擾，盡管后者需謹慎評估其對細胞活性的影響。
組織解離液的選擇并非“一刀切”，而是需結合組織來源、研究目的及下游技術平臺進行系統(tǒng)優(yōu)化。理想解離方案應在短時間內獲得高活性、高純度且轉錄組擾動最小的單細胞懸液。未來，隨著人工智能輔助實驗設計與高通量篩選平臺的發(fā)展，解離條件的個性化定制將更加精準高效，為單細胞多組學研究提供堅實基礎。
更新時間：2025-12-04
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